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信帆生物提供:凝膠遷移(EMSA)檢測(cè)服務(wù)

信帆生物提供:凝膠遷移(EMSA)檢測(cè)服務(wù)

服務(wù)介紹:EMSA也稱(chēng)為凝膠遷移實(shí)驗(yàn)或凝膠阻滯實(shí)驗(yàn),是一種用于研究蛋白質(zhì)與核酸(DNA或RNA)相互作用的分子生物學(xué)技術(shù)。通過(guò)該實(shí)驗(yàn),可以檢測(cè)蛋白質(zhì)是否與特定的核酸序列結(jié)合,并分析結(jié)合的特異性、親和力等。

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  • 更新時(shí)間:2025-02-14
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信帆生物提供:凝膠遷移(EMSA)檢測(cè)服務(wù)

服務(wù)介紹:EMSA也稱(chēng)為凝膠遷移實(shí)驗(yàn)或凝膠阻滯實(shí)驗(yàn),是一種用于研究蛋白質(zhì)與核酸(DNARNA)相互作用的分子生物學(xué)技術(shù)。通過(guò)該實(shí)驗(yàn),可以檢測(cè)蛋白質(zhì)是否與特定的核酸序列結(jié)合,并分析結(jié)合的特異性、親和力等。
檢測(cè)原理:
EMSA
基于核酸-蛋白質(zhì)復(fù)合物在電場(chǎng)中的遷移率與未結(jié)合核酸的蛋白質(zhì)或核酸單體不同的原理。當(dāng)特定的DNARNA片段(通常稱(chēng)為探針)與待測(cè)的蛋白質(zhì)樣品混合并孵育時(shí),如果蛋白質(zhì)能夠與探針結(jié)合,就會(huì)形成核酸-蛋白質(zhì)復(fù)合物。這種復(fù)合物由于分子量較大,在電場(chǎng)中的遷移速度會(huì)比未結(jié)合的核酸或蛋白質(zhì)慢。通過(guò)比較電泳后形成的條帶位置,可以判斷蛋白質(zhì)是否與核酸結(jié)合,以及結(jié)合的程度。
實(shí)驗(yàn)步驟:
通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNARNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA-復(fù)合物或RNA-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當(dāng)檢測(cè) 如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類(lèi)的DNA結(jié)合蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細(xì)胞抽提液。在檢測(cè)RNA結(jié)合蛋白時(shí),依據(jù)目的RNA結(jié)合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質(zhì)細(xì)胞抽提液。競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)中采用含蛋白結(jié)合序列的DNARNA片段和寡核苷酸片段(特異), 和其它非相關(guān)的片段(非特異),來(lái)確定DNARNA結(jié)合蛋白的特異性。在競(jìng)爭(zhēng)的特異和非特異片段的存在下,依據(jù)復(fù)合物的特點(diǎn)和強(qiáng)度來(lái)確定特異結(jié)合。
注意事項(xiàng):
1
、探針設(shè)計(jì):探針的長(zhǎng)度、序列和標(biāo)記方法都需要仔細(xì)考慮,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
2
、實(shí)驗(yàn)條件:實(shí)驗(yàn)條件(如溫度、pH值、離子強(qiáng)度等)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大影響,需要嚴(yán)格控制。
3
、結(jié)果分析:在分析結(jié)果時(shí),需要注意區(qū)分非特異性結(jié)合和特異性結(jié)合,以及考慮可能的競(jìng)爭(zhēng)性和抑制作用。

僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其他用途!

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