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人抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒

上海信帆生物代理銷售"人抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒"質(zhì)量保證,值得信賴.發(fā)貨時間:我司一般在款到后,1-2個工作日內(nèi)安排發(fā)貨,
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  • 更新時間:2024-10-07
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人抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

人抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒結(jié)果判定 

定性測定 
定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出""""的簡單回答,分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度,其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗,呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性更具定量意義。 在間接法和夾心法ELSIA中,陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反,陰性孔呈色深于陽性孔。兩類反應(yīng)的結(jié)果判斷方法不同,分述于下。
(1) 間接法和夾心法 
這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性。但在ELSIA中,正??蒲醒宸磻?yīng)后常可出現(xiàn)呈色的本底,此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異,因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物3.6)。在用肉眼判斷結(jié)果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。目視法簡捷明了,但頗具主觀性。在條件許可下,應(yīng)該用比色計測定吸光值,這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本(sample,S)、陽性對照(P)、和陰性對照(N)的吸光值,然后進(jìn)行計算。計算方法有多種,大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對照比值法兩類。
a. 陽性判定值 
陽性判定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù),以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。用此法判斷結(jié)果要求實驗條件十分恒定,試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,須配用精密的儀器,并嚴(yán)格按規(guī)定操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實驗檢測而得到的。現(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,先計算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),兩個平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個特定的數(shù)值0.400),試驗才有效。3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而已另兩個陰性對照重新計算NCX;如有兩個陰性對照A值超出以上范圍,則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算: 
陽性判定值=NCX+0.05 標(biāo)本A值>陽性判定值的為陽性,小于陽性判定值的為陰性。應(yīng)注意的是,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),只適合于該特定條件下,而不是對各種試劑均可通用。
根據(jù)以上敘述可以看出,在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質(zhì)控作用,試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會產(chǎn)生"試驗無效"的后果。
b.標(biāo)本/陰性對照比值 
在實驗條件包括試劑較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)A值后,計算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是樣本(patient)的縮寫,不應(yīng)誤解。為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的科研血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常科研血清的本底低得多。因此,這類試 
b. 抑制率法 
抑制率表示標(biāo)本在競爭結(jié)合中標(biāo)本對陰性反應(yīng)顯色的抑制程度,按下式計算:抑制率(%)= (陰性對照A-標(biāo)本A)×100%/陰性對照A.一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性,<50%為陰性。
定量測定 
ELSIA操作步驟復(fù)雜,影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的*,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數(shù)紙,以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點(diǎn)連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

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