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微生物鑒定中常用的生化反應(yīng)

更新時(shí)間:2024-04-24      瀏覽次數(shù):418

微生物鑒定中常用的生化反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)原理:

1. 有些細(xì)菌具有合成淀粉酶的能力,可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖,淀粉水解后遇碘不再變藍(lán)色。

2. 細(xì)菌產(chǎn)生的脂肪酶能分解培養(yǎng)基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培養(yǎng)基pH下降,可通過(guò)在油脂培養(yǎng)基中加入中性紅做指示劑進(jìn)行測(cè)試。中性紅指示范圍為pH6.8(紅)——8.0(黃)。當(dāng)細(xì)菌分解脂肪產(chǎn)生脂肪酸時(shí),則菌落周?chē)囵B(yǎng)基中出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)。

3. 某些細(xì)菌分泌蛋白酶分解明膠,產(chǎn)生小分子物質(zhì)。如果細(xì)菌具有分解明膠的能力,則培養(yǎng)基可由原來(lái)固體狀態(tài)變成液體狀態(tài)。

4. 牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成分。細(xì)菌對(duì)牛乳的利用主要是指對(duì)乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作為酸堿指示劑和氧化還原指示劑。石蕊中性時(shí)呈淡紫色,酸性時(shí)呈紅色,堿性時(shí)呈藍(lán)色,還原時(shí)則部分或全部脫色。細(xì)菌對(duì)牛乳的利用可分三種情況:(1)酸凝固作用:細(xì)菌發(fā)酵乳糖后,產(chǎn)生許多酸,使石蕊牛乳變紅,當(dāng)酸度很高時(shí),可使牛乳凝固,此稱(chēng)為酸凝固。(2)凝乳酶凝固作用:某些細(xì)菌能分泌凝乳酶,使牛乳中的酪蛋白凝固,這種凝固在中性環(huán)境中發(fā)生。通常這種細(xì)菌還具有水解蛋白質(zhì)的能力,因而產(chǎn)生氨等堿性物質(zhì),使石蕊變藍(lán)。(3)胨化作用:酪蛋白被水解,使牛乳變成清亮透明的液體。胨化作用可以在酸性條件下或堿性條件下進(jìn)行,一般石蕊色素被還原褪色。

小妙招:

1.如何解釋淀粉酶為胞外酶而非胞內(nèi)酶:淀粉為大分子物質(zhì),進(jìn)入細(xì)胞很困難,甚至需要高耗能的胞吞作用,因而通過(guò)胞外酶的作用,將淀粉水解為較小分子葡萄糖后再運(yùn)入細(xì)胞內(nèi),不需要高耗能的胞吞作用。

2. 碘液的作用:由于淀粉經(jīng)過(guò)水解會(huì)生成葡萄糖,葡萄糖為多羥基醛,因此可以利用醛這個(gè)基團(tuán)的特征性質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證,比如銀鏡反應(yīng),斐林試劑等,呈陽(yáng)性說(shuō)明淀粉水解產(chǎn)生葡萄糖。陰性則說(shuō)明淀粉沒(méi)有被水解。

注意事項(xiàng):

1. 在淀粉水解實(shí)驗(yàn)中,觀察各種細(xì)菌的生長(zhǎng)情況,加入碘液時(shí)要輕輕旋轉(zhuǎn),使得碘液均勻鋪滿(mǎn)整個(gè)平板。

2. 每個(gè)實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置陰性和陽(yáng)性對(duì)照組,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3. 細(xì)胞生長(zhǎng)較快,需要及時(shí)觀察和記錄。

4. 接種前要用記號(hào)筆做好標(biāo)記,接種時(shí)要


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