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5´-核苷酸酶(5´-NT)的測(cè)定試劑盒的注意點(diǎn)

更新時(shí)間:2023-12-07      瀏覽次數(shù):375

5′-核苷酸酶(5′-NT)的測(cè)定試劑盒的注意點(diǎn)

(比色法)

一、測(cè)定意義:

5′-核苷酸酶(5′-NT)廣泛分布于肝臟、膽道系統(tǒng)及各

種器官和組織中。血清中此酶活力增高(26)主要見于膽

道系統(tǒng)疾病,如阻塞性黃疸,原發(fā)性及繼發(fā)性肝癌等,且通

常與 ALP 的活力變化相平行。其增高機(jī)理是因高濃度的膽

鹽促使 5′-NT 從細(xì)胞膜上溶解出來,或膜通透性改變所致,

在骨骼系統(tǒng)的疾患如腫瘤轉(zhuǎn)移、畸形性骨炎、甲狀旁腺機(jī)能

亢進(jìn)、佝僂病等,ALP 活力通常增高,而 5′-NT 仍為正常

或?yàn)榕R界值。所以對(duì) ALP 活力增高患者,測(cè)定此酶有助于

判斷 ALP 活力增高是膽道系統(tǒng)疾病還是骨骼系統(tǒng)疾病引

起。此外,妊娠婦女及兒童期 5′-NT 不增高,但 ALP 均升

高。

二、測(cè)定原理

5′-核苷酸酶(5′-NT)催化腺苷-5′-磷酸水解,生成腺

苷和無機(jī)磷。測(cè)定產(chǎn)物無機(jī)磷的含量,代表 5′-NT 活力。可

以用抑制劑去除其他酶的影響。

三、試劑組成與配制:(100T/48 樣)

試劑一:液體 80mL×1 瓶,4℃冷藏 個(gè)月;過飽和溶液,

會(huì)有針狀結(jié)晶析出,取上清使用。

試劑二:液體 12mL×1 瓶,4℃冷藏 個(gè)月。

試劑三:液體 6mL×1 瓶。4℃冷藏 個(gè)月。

試劑四:粉劑 支,稀釋液 6mL×2 支,4℃冷藏 年。臨用

時(shí)將1支粉劑倒入1支稀釋液中,混勻溶解(現(xiàn)

用現(xiàn)配),配好后 4℃可保存二周。

試劑五:液體 60mL×2 瓶,該試劑有腐蝕性,盡量不要碰到

皮膚上,4℃保存 年。

試劑六:液體 50mL×1 瓶,該試劑有腐蝕性,盡量不要碰到

皮膚上,室溫或 4℃保存 年。

試劑七:粉劑×1瓶,

4℃保存1年;臨用前每瓶加雙蒸水40mL

溶解,現(xiàn)用現(xiàn)配,配好后 4℃避光可保存一周;

試劑八:粉劑×1 瓶,4℃保存 年;每瓶加雙蒸水 50mL 

解,溶解后 4℃保存 個(gè)月;

工作液一的配制按試劑一:試劑二:試劑四=7:1:1 的比例

配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。根據(jù)您的樣本數(shù),放寬 1-2 個(gè)

樣本的量,需多少配多少。

工作液二的配制按試劑一:試劑二:試劑三:試劑四=6:1:1:1

的比例配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。根據(jù)您的樣本數(shù),放寬

1-2 個(gè)樣本的量,需多少配多少。

定磷劑的配制:按雙蒸水:試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1

比例,先后順序配制,現(xiàn)用現(xiàn)配,好后 4℃避光可保

 48 小時(shí)。(配試劑所用器皿以及雙蒸水,一定

嚴(yán)格防止磷污染)

試劑九:6mmol/L 磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液 5mL×1 瓶,4℃冷藏 個(gè)月;

0.06mmol/L 磷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制: 6mmol/L 磷標(biāo)準(zhǔn)貯備

 0.05mL 用試劑五稀釋至 5mL 即(100 倍稀釋),

現(xiàn)用現(xiàn)配,配好后可保存 48 小時(shí)。

 

六、注意點(diǎn):

1、血漿可能會(huì)出現(xiàn)混濁,如有混濁可 3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘

取上清進(jìn)行檢測(cè)。與金屬螯合的抗凝劑會(huì)干擾反應(yīng)。肝素

抗凝不會(huì)影響。

2、如樣本中酶活性偏低,可將酶促反應(yīng)時(shí)間延長至 60 分鐘,

亦可(計(jì)算公式相應(yīng)改變)。

3、所用器皿嚴(yán)防磷污染,測(cè)試所用試管要求嚴(yán)格,要沒有一

點(diǎn)磷,若試管放過磷酸或磷酸鹽緩沖液,一定要洗得非常

干凈,要先用清潔劑加水煮,再用自來水沖,最后用蒸餾

水沖干凈。最好用一次性塑料試管(本所有售),避免磷污

染是檢測(cè)成敗的關(guān)鍵。

附錄Ⅰ :組織中 5′-NT 測(cè)定

一、樣本前處理:

準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g:體積(mL=1:9

的比例,加入 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件機(jī)械勻漿,

2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清液進(jìn)行測(cè)定。

[]:不可用含磷的試劑作為勻漿介質(zhì)(例如 PBS),建

議用生理鹽水。

附錄Ⅱ:血清(漿)5'-NT 測(cè)定

一、樣本前處理:血清(漿)直接取樣進(jìn)行檢測(cè)。

5′-核苷酸酶(5′-NT)的測(cè)定試劑盒的注意點(diǎn)


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