国产高清白丝在线观看,国产精品久久精品日日,97人人添人澡人人爽超碰,国产精品久久久久久久水密桃

熱門搜索: 肌酸激酶MB型同工酶(CK-MM)質(zhì)控樣品 抗血漿鑒別試劑盒 甲種胎兒球蛋白抗原 重組核心鏈霉親和素 2(不帶標(biāo)簽) 重組鏈霉親和素(r-ScSA)(NC膜專用) 重組鏈霉親和素(帶His標(biāo)簽) 羊抗人視-黃醇結(jié)合蛋白多克隆抗體 大鼠白細(xì)胞介素1β(IL-1β)試劑盒(ELISA) 人堿性成纖維細(xì)胞生長因子ELISA試劑盒 1%豚鼠紅細(xì)胞 2%雞紅細(xì)胞 1%雞紅細(xì)胞 重組人線粒體核糖體蛋白S2(MRPS2) 重組人蛋白酶體激活物亞基1(PSME1)蛋白 重組人肝癌衍生生長因子相關(guān)蛋白3 重組人FAM83A蛋白

PRODUCT CLASSIFICATION

產(chǎn)品分類

技術(shù)文章/ Technical Articles

您的位置:首頁  /  技術(shù)文章  /  專業(yè)的RT-PCR實(shí)驗(yàn)代測服務(wù)商

專業(yè)的RT-PCR實(shí)驗(yàn)代測服務(wù)商

更新時(shí)間:2023-06-08      瀏覽次數(shù):906

專業(yè)的RT-PCR實(shí)驗(yàn)代測服務(wù)商


服務(wù)內(nèi)容:

1.制定個(gè)性化實(shí)驗(yàn)方案:根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康拇_定實(shí)驗(yàn)方案、選定合適的內(nèi)參;
2.檢測類別:mRNA、miRNA、lncRNA、DNA;
3.樣本抽提及質(zhì)檢:對(duì)客戶提供樣本進(jìn)行RNA抽提,并利用NanoDrop進(jìn)行樣本質(zhì)檢;
4.定量PCR預(yù)實(shí)驗(yàn):包括樣本反轉(zhuǎn)錄為CDNA、配置PCR反應(yīng)體系及進(jìn)行Real-TimePCR反應(yīng);
5.正式定量PCR實(shí)驗(yàn):根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn);
6.數(shù)據(jù)分析:采用2- △△CT法進(jìn)行分析,比較不同樣本間差異。



服務(wù)要求:
1.請(qǐng)?zhí)峁┙M織樣本,細(xì)胞樣本,血漿或血清樣本,totalRNA;
2.請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L基因序列或GeneBank號(hào);
3.請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA來源、基因豐度等。


結(jié)果內(nèi)容:整理好的報(bào)告,樣本收到之日起5個(gè)工作日內(nèi)反饋質(zhì)檢結(jié)果。

結(jié)果展示:

樣本質(zhì)檢圖



溶解曲線:



擴(kuò)增曲線


數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)


每個(gè)指標(biāo)有2張圖。一張是擴(kuò)增曲線,另一張是熔解曲線,用來證明PCR擴(kuò)增中無非特異性擴(kuò)增



送樣運(yùn)輸要求:


1. 樣品處理


a. 動(dòng)物組織:常規(guī)組織,脂肪組織,結(jié)締組織,纖維化組織適當(dāng)增加。將組織剪切成合適大小后(建議組織塊長寬高均不大于0.5 cm),然后迅速浸泡于5~10倍體積的RNAsolidTM試劑中。(注意:已浸入RNAsolidTM試劑中的組織經(jīng)平衡一段時(shí)間后,可從溶液中取出,切成更小的組織塊,再重新放回RNAsolidTM試劑中;有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等,不適合用RNAsolidTM試劑進(jìn)行RNA保護(hù)。)


b.植物組織:新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉,嫩莖組織切成合適的大?。ńㄗh長寬高均不大于0.5 cm)后,然后迅速浸泡于5~10倍體積的RNAsolidTM試劑中。(注意:某些植物組織天生具有的屏障,如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolidTM試劑的滲透,對(duì)于此類組織,通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。)


c.細(xì)胞等樣本:收集不小于10^6個(gè)細(xì)胞的沉淀(用PBS清洗1-2次)。之后迅速加入5~10倍體積的RNAsolidTM試劑。


d.酵母、細(xì)菌等樣本:離心棄上清,收集小米粒大小的單菌體沉淀,然后迅速加入適量的RNAsolidTM試劑浸沒菌體沉淀。


e. RNA樣品: OD260/280為1.8-2.0,濃度≥100 ng/μL,體積≥20μL,干冰運(yùn)輸。


f.cDNA:cDNA原液≥20 μL,干冰運(yùn)輸。


2. 樣品保存及運(yùn)輸


加入有RNAsolidTM試劑的樣本可在37℃保存1~2天,2天以后部分組織中的RNA會(huì)開始降解。室溫(25℃)穩(wěn)定保存1周,不會(huì)有明顯的RNA降解發(fā)生。大部分樣品置于RNAsolidTM試劑中,4℃條件下可穩(wěn)定保存1個(gè)月,不會(huì)有明顯的RNA降解發(fā)生。長期存放可先將保存在RNAsolidTM試劑中的樣本4℃浸透過夜,然后將RNAsolidTM試劑吸出棄去,再將樣本放入-20℃或-80℃長期穩(wěn)定保存3~5年。


關(guān)于Real-time qPCR如何進(jìn)行數(shù)據(jù)分析


1. Real-time qPCR常見參數(shù)

基線(baseline)

通常是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)

同一次反應(yīng)中針對(duì)不同的基因需單獨(dú)設(shè)置基線

閾值(threshold)

自動(dòng)設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍

手動(dòng)設(shè)置:置于指數(shù)擴(kuò)增期,剛好可以清楚地看到熒光信號(hào)明顯增強(qiáng)

同一次反應(yīng)中針對(duì)不同的基因可單獨(dú)設(shè)置閾值,但對(duì)于同一個(gè)基因擴(kuò)增一定要用同一個(gè)閾值。

Ct值:與起始濃度的對(duì)數(shù)成線性關(guān)系。

分析定量時(shí)候一般取Ct:15-35。太大或者太小都會(huì)導(dǎo)致定量的不準(zhǔn)確。

Rn(Normalized reporter)是熒光報(bào)告基團(tuán)的熒光發(fā)射強(qiáng)度與參比染料的熒光發(fā)射強(qiáng)度的比值。
△Rn:△Rn是Rn扣除基線后得到的標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果(△Rn=Rn-基線)。

2. 影響Ct值的關(guān)鍵因素

模板濃度

模板濃度是決定Ct的最主要因素??刂圃谝粋€(gè)合適范圍內(nèi),使Ct在15-35之間

反應(yīng)液成分的影響

任何分子的熒光發(fā)射都受環(huán)境因素影響----比如溶液的pH值和鹽濃度。

PCR反應(yīng)的效率

PCR反應(yīng)的效率也會(huì)影響Ct值。在PCR擴(kuò)增效率低的條件下進(jìn)行連續(xù)梯度稀釋擴(kuò)增,與PCR擴(kuò)增效率高的條件下相比,可能會(huì)所產(chǎn)生斜率不同的標(biāo)準(zhǔn)曲線。PCR效率取決于實(shí)驗(yàn)、反應(yīng)混合液性能和樣品質(zhì)量。一般說來,反應(yīng)效率在90-110%之間都是可以接受的。

3. 如何評(píng)估實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)的效果

PCR擴(kuò)增效率:為了正確地評(píng)估PCR擴(kuò)增效率,至少需要做3次平行重復(fù),至少做5個(gè)數(shù)量級(jí)倍數(shù)(5logs)連續(xù)梯度稀釋模板濃度。


另一個(gè)評(píng)估PCR效率的關(guān)鍵參數(shù)是相關(guān)系數(shù)R2,它是說明兩個(gè)數(shù)值之間相關(guān)程度的統(tǒng)計(jì)學(xué)術(shù)語。如果R2等于1,那么你可以用Y值(Ct)來準(zhǔn)確預(yù)測X值(量)。如果R2等于0,你就不能通過Y值來預(yù)測X值。R2值大于0.99 時(shí),兩個(gè)數(shù)值之間相關(guān)的可信度很好。


標(biāo)準(zhǔn)偏差(standard deviation,偏差的平方根)是的精確度計(jì)量方法。

如果許多數(shù)據(jù)點(diǎn)都靠近平均值,那么標(biāo)準(zhǔn)偏差就?。蝗绻S多數(shù)據(jù)點(diǎn)都遠(yuǎn)離平均值,則標(biāo)準(zhǔn)偏差就大。實(shí)際上,足夠多重復(fù)次數(shù)產(chǎn)生的數(shù)據(jù)組會(huì)形成大致的正態(tài)分布。這經(jīng)??赏ㄟ^經(jīng)典的中心極限理論來證明,獨(dú)立同分布隨機(jī)變量在無限多時(shí)趨向于正態(tài)分布。如果PCR反應(yīng)效率是 100%,那么2倍稀釋點(diǎn)之間的平均Ct間隔應(yīng)該恰為1個(gè)Ct值。要以99.7%的幾率分辨2倍稀釋濃度,標(biāo)準(zhǔn)偏差就必須小于等于0.167。標(biāo)準(zhǔn)偏差越大,分辨2倍稀釋的能力就越低。為了能夠在95%以上的情況下分辨出2倍稀釋,標(biāo)準(zhǔn)偏差必須小于等于 0.250



專業(yè)的RT-PCR實(shí)驗(yàn)代測服務(wù)商



微信掃一掃

郵箱:1170233632@qq.com

傳真:021-51870610

地址:上海市顧戴路2988號(hào)B幢7樓

Copyright © 2025 上海信帆生物科技有限公司版權(quán)所有   備案號(hào):滬ICP備13019554號(hào)-1    技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)

TEL:13764793648

掃碼加微信
亚洲黑人欧美一区二区三区-亚洲一区二区三区免费视频播放| 国产精品久久99精品毛片-国产四季高清一区二区三区| 欧美精品啪啪人妻一区二区-嫩草人妻舔舔羞羞一区二区三区| 青青操大香蕉在线播放-国产亚洲欧美精品在线观看| 日本高清二区视频久二区-大香蕉在线视频大香蕉在线视频| 美女把腿张开给帅哥桶-无码无套少妇18p在线直播| 一区二区三区日本韩国欧美-日本1区2区3区4区在线观看| 久久精品人妻一区二区三区极品-久久99热这里只有精品免费| 在线观看中午中文乱码-2021国产一级在线观看| 五月婷婷六月在线观看视频-亚洲黑寡妇黄色一级片| 欧美三级韩国三级日本三斤-日本不卡一区不卡二区| 丝袜高跟熟女视频国产-熟女少妇亚洲一区二区| 一区二区三区国产高清mm-美女张开腿让帅哥桶爽| 亚洲精品在线观看一二三区-在线观看国产中文字幕视频| 乱入一二三免费在线观看-久久精品亚洲精品国产色婷婷| 欧美精品一区二区不卡-精品国产一区二区三区香蕉网址| 久久亚州天堂一区二区-色噜噜色哟哟一区二区三区| 青木玲高清中文字幕在线看-视频在线免费观看你懂的| 国产欧美成人精品第一区-日本黄色精品一区二区| 久久网站中文字幕精品-三级精品久久中文字幕| 欧美一区二区三区调教视频-三上悠亚国产精品一区二区三区| 可以免费看污污视频的网站-日韩欧美不卡视频在线观看| 日韩精品一区二区三区粉嫩av-欧美亚洲国产中文字幕| 中文字幕日本在线资源-国产+成+人+亚洲欧洲自线| mm在线精品视频在线观看-欧美国产日韩在线一区二区三区| 亚洲最新国产无人区123-黄片一区二区在线观看| 18禁真人在线无遮挡羞免费-中文字幕精品一区二区三区四区| av中文字幕男人天堂-懂色av一区二区三区在线观看| 色婷婷六月婷婷一区二区-91草草国产欧美在线观看| 亚洲精品一区网站在线观看-黄页视频免费观看网站| 青青草原免费国产在线视频-精品人妻乱码一区二区三区四区| 中文字幕日韩不卡久久-五月天中文字幕啊av| 日本中文字幕永久在线人妻蜜臀-欧美一区二区的网站在线观看| 三级a级一级大片在线观看-日韩av有码免费观看| 欧美亚洲另类久久久精品-国产精品一区二区亚洲推荐| 国产高清av免费在线观看-黄片毛片大全一区二区三区| 看肥婆女人黄色儿逼视频-秋霞电影一区二区三区四区| 性色国产成人久久久精品二区三区-偷窥中国美女洗澡视频| 久久99热这里都是精品啊-国产成人亚洲精品无码aV| 蜜臀av日日欢夜夜爽一区-av在线免费永久播放| 人妻互换精品一区二区-夜夜爽一区二区三区视频|