国产高清白丝在线观看,国产精品久久精品日日,97人人添人澡人人爽超碰,国产精品久久久久久久水密桃

熱門搜索: 肌酸激酶MB型同工酶(CK-MM)質(zhì)控樣品 抗血漿鑒別試劑盒 甲種胎兒球蛋白抗原 重組核心鏈霉親和素 2(不帶標(biāo)簽) 重組鏈霉親和素(r-ScSA)(NC膜專用) 重組鏈霉親和素(帶His標(biāo)簽) 羊抗人視-黃醇結(jié)合蛋白多克隆抗體 大鼠白細(xì)胞介素1β(IL-1β)試劑盒(ELISA) 人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒 1%豚鼠紅細(xì)胞 2%雞紅細(xì)胞 1%雞紅細(xì)胞 重組人線粒體核糖體蛋白S2(MRPS2) 重組人蛋白酶體激活物亞基1(PSME1)蛋白 重組人肝癌衍生生長(zhǎng)因子相關(guān)蛋白3 重組人FAM83A蛋白

PRODUCT CLASSIFICATION

產(chǎn)品分類

技術(shù)文章/ Technical Articles

您的位置:首頁(yè)  /  技術(shù)文章  /  組織細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒的使用方法

組織細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒的使用方法

更新時(shí)間:2022-12-07      瀏覽次數(shù):976

組織細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒的使用方法


本試劑盒能夠從哺乳動(dòng)物新鮮或凍存的組織塊、貼壁或懸浮細(xì)胞中制備細(xì)胞 膜與胞內(nèi)質(zhì)膜組分。其試劑成分與優(yōu)化的制備方案使胞膜制備過(guò)程簡(jiǎn)單易行,無(wú)需特殊設(shè)備和超速離心,可在1小時(shí)內(nèi)完成。應(yīng)用本試劑盒制備的胞膜是細(xì)胞 膜和細(xì)胞器膜如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及質(zhì)膜的混合物。制備得到的產(chǎn)物純度可勝任后續(xù)的免疫沉淀、蛋白印跡、2-D gel、酶活性檢測(cè)和受體分析等實(shí)驗(yàn)。

組成:(以下是50次規(guī)格用量)

CER  (Cytosol Extraction Reagent)       25ml    

MER (Membran Extraction Reagent)     2.5ml

Suspension Buffer                      10ml

 

儲(chǔ)存:各組分4度 有效期12個(gè)月

操作步驟:

一.樣本預(yù)處理:

收集細(xì)胞:(在每一次制備過(guò)程中,使用等量的細(xì)胞數(shù)將明顯提高后續(xù)檢測(cè)結(jié)果的一致性,因此建議在制備前對(duì)細(xì)胞準(zhǔn)確計(jì)數(shù))

1.      貼壁細(xì)胞:用PBS緩沖液沖洗細(xì)胞平皿,用胰蛋白酶消化細(xì)胞。800g離心5-10分鐘,棄上清,用PBS緩沖液重懸洗滌細(xì)胞并再次離心收集細(xì)胞。

2.      懸浮細(xì)胞:800g離心5-10分鐘,棄上清。用PBS緩沖液重懸洗滌細(xì)胞并再次離心收集細(xì)胞。

以下制備過(guò)程要在4 oC或冰水浴中進(jìn)行

二.組織細(xì)胞勻漿裂解

1.      細(xì)胞勻漿裂解

向每1x107個(gè)細(xì)胞或每100µl(細(xì)胞離心后的體積)細(xì)胞沉淀中加入500µlCER試劑,震蕩重懸,冰浴2分鐘。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到冰預(yù)冷的玻璃勻漿器內(nèi),在冰水浴中上下手動(dòng)勻漿20-30次。

注意:此破碎細(xì)胞步驟為關(guān)鍵環(huán)節(jié)。要使用1-3ml小容積玻璃勻漿器,須選用間隙嚴(yán)密的研杵,其特征是將研杵插入勻漿器套管后,可提起研杵而套管不會(huì)脫落。有效研磨是上下推拉而不是旋轉(zhuǎn)。破碎效果與細(xì)胞類型有關(guān),可在相差顯微鏡下檢查,未裂解細(xì)胞應(yīng)小于5%。

2.        組織塊勻漿裂解:

取250mg哺乳動(dòng)物新鮮或-80 oC凍存組織塊放入冰預(yù)冷的玻璃勻漿器內(nèi),加入500µlCER試劑。用研杵搗碎組織塊,上下手動(dòng)勻漿20次,冰浴10分鐘,然后上下手動(dòng)勻漿7次。

注意:與培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁細(xì)胞相比,組織塊中的細(xì)胞在勻漿時(shí)較易破碎,因而并非必須選擇間隙嚴(yán)密的研杵。如果研杵與套管過(guò)于嚴(yán)密,會(huì)使組織勻漿困難,可選用研杵與套管稍松的勻漿器,破碎效果與組織細(xì)胞類型有關(guān),可在相差顯微鏡下檢查,未裂解細(xì)胞應(yīng)少于5%。

三、粗提物制備:

取約500µl裂解物,轉(zhuǎn)移到新的離心管中,800g ,4oC離心5分鐘。上清為胞膜-胞漿混合物。

四、胞膜胞漿制備:

1)將步驟三獲得的上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中,估計(jì)上清的體積; 2)加入上清液1/10體積的MER與上清液混合,冰浴5分鐘;3)14,000rpm,4oC離心30分鐘;4)沉淀為胞膜組分,含有細(xì)胞 膜和亞細(xì)胞器碎片,可短暫離心除盡液體,用50-100µl Suspension Buffer重懸備用或用RIPA裂解胞膜;做WB時(shí)膜蛋白分子量100KD以上的建議用較強(qiáng)的蛋白提取試劑如加強(qiáng)的RIPA,便于獲取溶解度低的膜蛋白,具體方案根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康拇_定。             

說(shuō)明:

1.       Suspension Buffer不含去垢劑,重懸于Suspension Buffer中的胞膜或胞核組分呈不溶解狀態(tài)是正常的,用戶可用自備溶液重懸胞膜或胞核成分。如果進(jìn)行蛋白印跡、2-D get等實(shí)驗(yàn),用戶可用SDS上樣緩沖直接裂解細(xì)胞 膜或細(xì)胞核成分。對(duì)于進(jìn)行免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō),可用RIPA裂解液(C1053)重懸胞膜。

2.      試劑盒各組分中未添加蛋白酶抑制劑,可自行選擇添加。

組織細(xì)胞膜蛋白提取試劑盒的使用方法

微信掃一掃

郵箱:1170233632@qq.com

傳真:021-51870610

地址:上海市顧戴路2988號(hào)B幢7樓

Copyright © 2025 上海信帆生物科技有限公司版權(quán)所有   備案號(hào):滬ICP備13019554號(hào)-1    技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)

TEL:13764793648

掃碼加微信
在线免费观看黄片喷水-国产精品白丝网站在线观看| 18禁真人在线无遮挡羞免费-中文字幕精品一区二区三区四区| 一级小黄片在线免费看-亚洲欧美午夜情伊人888| 91蜜桃传媒一二三区-日韩欧美国产一区呦呦| 成人免费资源在线观看-欧美国产日韩高清在线综合| 国产美女网站在线观看-国产精品亚洲综合网69| 97人妻精品一区二区三区爱与-日韩精品亚洲专区在线观看| 亚洲一区二区少妇激情-国产精品美女久久高潮| 青木玲高清中文字幕在线看-视频在线免费观看你懂的| 91精品国产影片一区二区三区-欧美精品久久久精品一区二区| 久久精品亚洲无中文东京热-日本妹子内谢视频一区| 国产欧美成人精品第一区-日本黄色精品一区二区| 国产黄片在现免费观看-色老板最新在线播放一区二区三区| sobo欧美在线视频-免费av网址一区二区| 蜜臀av日日欢夜夜爽一区-av在线免费永久播放| 人妻日韩精品中文字幕图片-麻豆极度性感诱人在线露脸| 国内精产熟女自线一二三区-六月丁香婷婷在线观看| 性激烈欧美三级在线播放-久久中文字幕人妻少妇| 日韩精品一区二区三区粉嫩av-欧美亚洲国产中文字幕| 国产黄片在现免费观看-色老板最新在线播放一区二区三区| 韩漫一区二区在线观看-精品国产免费未成女一区二区三区| 亚洲精品蜜桃在线观看-国产欧美日韩在线观看精品观看| 国产精品成人欧美激情-黄色床上完整版高清无遮挡| 欧美成人精品巨臀大屁股-亚洲综合欧美日韩一区| 极品人妻av在线播放-久久精品视频一区二区三区| 99热在线精品免费6-av一区二区在线观看| 久久亚州天堂一区二区-色噜噜色哟哟一区二区三区| 久久蜜桃精品一区二区-麻豆视频啊啊啊好舒服| 久色高清精品在线国产-国产精品视频一区三区四区| 欧美精品国产白浆久久正在-国产精彩视频一区二区三区| 婷婷六月视频在线观看-久久亚洲综合国产精品| 日本高清二区视频久二区-大香蕉在线视频大香蕉在线视频| 亚洲产国偷v产偷v自拍性色av-亚洲欧美日韩国产三区| 亚洲福利视频免费观看-中文字幕日本不卡一区二区| 熟女少妇免费一区二区-麻豆一区二区三区免费在线观看| 交换朋友的妻子中文字幕-日本美女8x8x8x8| 国产欧美日韩中文字幕在线-国产伊人一区二区三区四区| 亚洲欧洲成视频免费观看-国产福利一区二区在线观看| 91大神国内精品免费网站-亚洲免费电影一区二区| 一区二区三区国产高清mm-美女张开腿让帅哥桶爽| 久久蜜桃精品一区二区-麻豆视频啊啊啊好舒服|