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明膠酶譜法試劑盒的染色步驟及使用注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2022-10-24      瀏覽次數(shù):571
  明膠酶譜法試劑盒的染色步驟:
 
  1、此染色液即為工作液,使用時(shí)直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝膠,并緩慢搖動(dòng)2h;
 
  2、傾去染色液,用脫色液沖洗凝膠;
 
  3、以脫色液覆蓋凝膠,緩慢搖動(dòng)2h,傾去脫色液,再加入新脫色液進(jìn)行脫色,直至獲得清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景(通常此過(guò)程需要2~4h,也可脫色過(guò)夜至清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景);
 
  4、對(duì)凝膠進(jìn)行分析和照相,凝膠可放置在7%的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置(P2000)對(duì)凝膠進(jìn)行處理后保存。安全性:含有甲醇,無(wú)特殊毒性,按一般化學(xué)品操作規(guī)程處理。
 
  明膠酶譜法試劑盒的使用注意事項(xiàng):
 
  1、制備聚丙烯酰胺時(shí)應(yīng)注意排除氣泡。
 
  2、明膠酶譜的活性受鈣離子,鋅離子,和PH值等因素的影響,因此緩沖液配制應(yīng)嚴(yán)格準(zhǔn)確,盡量用超純水,孵育溫度也掌握好。
 
  3、用大梳子。
 
  4、孵育液的PH在7.5-7.6,復(fù)性的TRITON時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)有絮狀物,所以實(shí)驗(yàn)時(shí)盡量使用新鮮配置的。
 
  5、孵育的37度不要在CO2培養(yǎng)箱中,因?yàn)闀?huì)改變孵育液的PH值,在普通孵箱即可。
 
  6、細(xì)胞樣本用PBS5倍體積震蕩裂解,估算細(xì)胞的體積,然后加入5倍體積的PBS,渦旋振蕩15-30s,而后靜置或低速離心或者手動(dòng)震蕩。
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