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DNA含量檢測試劑盒,脫氧核糖核酸檢測試劑盒

更新時(shí)間:2020-06-29      瀏覽次數(shù):1361

DNA含量檢測試劑盒,脫氧核糖核酸檢測試劑盒

DNA含量檢測試劑盒

DNA Content Quantitation Assay(Cell Cycle)

規(guī)格:20T/50T

保存:-20℃避光保存,一年有效。

試劑組成 :

試劑名稱

20T

50T

保存條件

RNase A

2.0mL

5.0mL

-20℃

PI 染色液

8.0mL

20.0mL

-20℃避光

產(chǎn)品說明

細(xì)胞周期是指連續(xù)分裂細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個過程。在這個過程中,細(xì)胞遺傳物質(zhì)復(fù)制并加倍,且在分裂結(jié)束時(shí)平均分配到兩個子細(xì)胞中去。細(xì)胞周期又可以分為間期和有絲分裂期,細(xì)胞間期常劃分為休眠期(G 0 ),DNA 合成前期(G 1 ),DNA 合成期(S),DNA 合成后期(G 2 ),整個周期可表示為 G 1 →S→G 2 →M。DNA 周期檢測可用來反應(yīng)細(xì)胞周期的各個期的狀況,即細(xì)胞增殖狀況。利用細(xì)胞內(nèi) DNA 能夠和熒光染料(如碘化丙啶 PI)結(jié)合的特性,細(xì)胞各個時(shí)期其 DNA 含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同,流式細(xì)胞儀檢測的熒光強(qiáng)度也不一樣。

    細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),由于胞漿和染色質(zhì)濃縮,核裂解,產(chǎn)生凋亡小體,使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期,細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低,對 90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期,前向角和 90°角光散射的信號均降低。因此可以通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化來觀察凋亡細(xì)胞。用 PI 對細(xì)胞進(jìn)行染色,凋亡細(xì)胞由于總 DNA 量降低,于正常 G 0 /G 1 細(xì)胞群前出現(xiàn) DNA 低染細(xì)胞群,即G 1峰前出現(xiàn)亞二倍體峰(sub-G 1),即細(xì)胞凋亡群。

    本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞(懸浮、貼壁)的 DNA 含量(細(xì)胞周期)檢測。

使用方法 :( 僅供參考 

1、 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡,同時(shí)設(shè)立陰性對照組,并收集細(xì)胞。

2、 用 PBS 洗滌細(xì)胞一次,1500rpm,5min 離心收集,調(diào)整細(xì)胞濃度為 1×106/ml,取 1ml 單細(xì)胞懸液。

3、 制備的單細(xì)胞懸液離心后,去除上清,在細(xì)胞中加入70%預(yù)冷乙醇 500ul 固定2小時(shí)至過夜,4℃保存,染色前用PBS洗去固定液;如需要,細(xì)胞懸液可用200目細(xì)胞篩網(wǎng)過濾一次。

4、 細(xì)胞沉淀中加 100µl RNase A 溶液,重懸細(xì)胞,37℃水浴 30min。

5、 再加入 400µl PI 染色液混勻,4℃避光孵育 30min。

6、 上機(jī)檢測,記錄激發(fā)波長 488nm 處紅色熒光。

注意事項(xiàng) :

碘化丙啶(PI)染色液保存和使用過程中應(yīng)注意避光。

PI 有毒,操作時(shí)應(yīng)戴手套,并避免污染。

熒光染料都存在淬滅問題,建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。

DNA含量檢測試劑盒,脫氧核糖核酸檢測試劑盒

 

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