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軟骨染色液(阿利新藍法,pH1.0)的操作方法

更新時間:2019-05-09      瀏覽次數(shù):2514


   阿利新藍(Alcian)又稱愛先藍或阿爾辛藍等,是一種類銅鈦花青共軛染料,zui初用于紡織纖維染色。這種陽離子染料與酸性基團結(jié)合,也即阿爾辛藍與組織內(nèi)含有的陰離子基團如羧基和硫酸根形成不溶性復合物。阿利新藍由中央含銅的酞菁環(huán)與四個異硫脲基通過硫醚鍵相連而成,該異硫脲基呈中度堿性,使阿利新藍帶陽離子。pH值為2.5時,組織內(nèi)的羧基電離,帶有一個負電荷,與阿利新藍中的陽離子形成鹽鍵,使帶有羧基的酸性黏液物質(zhì)(硫酸黏蛋白和唾液黏蛋白)染色。pH值為1.0時,組織內(nèi)的硫酸根電離,帶有一個負電荷,與阿利新藍中的陽離子形成鹽鍵,使帶有硫酸根的組織(如硫酸黏液物質(zhì))染色。
  軟骨染色液(阿利新藍法,pH1.0)利用染液的不同pH 值可區(qū)分粘液物質(zhì)的類屬,pH為1時,羧基(COOH)不著色,硫酸基(OSO3H)著色,pH為 2.5 時,羧基染色良好而硫酸粘液著色不佳,使硫酸黏蛋白和唾液黏蛋白著色。
操作步驟(僅供參考):
1、常規(guī)脫鈣,二甲苯脫蠟,通過梯度乙醇后,入蒸餾水再水化。
2、入Alcian酸化液浸泡3min。
3、入Alcian染色液染色30min。
4、流水沖洗5min。
5、梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片
注意事項:
1、固定液采用10%中性福爾馬林。
2、該法可區(qū)分鑒別硫酸黏蛋白和蛋白多糖,其pH=1.0。
3、已開封試劑應在開封后6個月內(nèi)使用完,每次用后應及時擰緊瓶蓋,以免揮發(fā)或變質(zhì)。
4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套
 本試劑僅適用于科研領域,不適用于研究診斷或其他用途。
 

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