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解鎖大鼠葉酸(FA)elisa試劑盒的小秘密

更新時(shí)間:2017-08-01      瀏覽次數(shù):1493

大鼠葉酸(FA)elisa試劑盒簡(jiǎn)介

葉酸是一種水溶性維生素,它不存在于自然界中也無(wú)生物活性,但為具有生物活性的葉酸鹽(folate)的前體。葉酸鹽在自然界廣泛存在,動(dòng)植物中都有,肝、腎、綠葉蔬菜、土豆、麥麩等含量豐富。葉酸能傳遞一碳基團(tuán)(甲基或甲酰)給脫氧尿苷酸,使之變?yōu)槊撗跣剀账?,進(jìn)而合成DNA。

大鼠葉酸(FA)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)條件選擇

在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:

 ?。?) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

 ?。?) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。

  (3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

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2.靈敏度高。 酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng) ,產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。我們的試劑盒實(shí)現(xiàn)了在ug、ng、pg水平上對(duì)其進(jìn)行定量。

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